Données techniques
Mode d'emploi des colonnes/plaques de dessalement c18
Présentation du produit
Les colonnes/plaques de dessalement C18 sont remplies d'une matrice de gel de silice C18, dont le groupe fonctionnel octadécyle présente une hydrophobicité élevée et d'excellentes propriétés de rétention des composés apolaires. Elles peuvent adsorber les molécules d'amorces/oligos/ADN avec DMT sans rétention de sel, ce qui permet d'obtenir des produits d'amorces/oligos/ADN de haute pureté.
Guide de sélection
BM Life Sciences propose des colonnes/plaques de dessalement C18 de différentes tailles. Vous pouvez choisir la colonne de dessalement adaptée à la concentration en amorces/oligonucléotides. Pour le traitement par lots, vous pouvez opter pour une plaque de dessalement à 96 puits.
| Numéro de produit | norme | Spécifications applicables aux oligonucléotides | Étapes de référence |
| SPEC18W150 | 50 mg/1 ml | 10 nmol - 200 nmol | Étape 5 |
| SPEC18W3100 | 100 mg/3 ml | 10 nmol - 600 nmol | Étape 1 |
| SPEC18W3300 | 300 mg/3 ml | 10 nmol - 2 .opmol | Étape 2 |
| SPEC18W61000 | 1 g/6 ml | 1 umol - 6 umol | Étape 3 |
| SPEC18W9630 | Plaque 30 mg/96 puits | 5 nmol - 100 nmol | Étape 4 |
| SPEC18W9650 | Plaque 50 mg/96 puits | 10 nmol - 200 nmol | Étape 4 |
| SPE15C18W9680 | Plaque 80 mg/96 puits (plaque 96 puits 1,5 ml) | 10 nmol - 500 nmol | Étape 5 |
| SPE23C18W9680 | Plaque 80 mg/96 puits (plaque 96 puits 2,3 ml) | 10 nmol - 500 nmol | Étape 5 |
Note
La colonne/plaque de nettoyage C18 peut également dessaler le produit brut et l'apprêt/oligo après purification HPLC et PAGE, voir l'étape 5 pour plus de détails.
Réactif
Acétonitrile de qualité chromatographique
0,1 M THÉ, PH7,0
0,5 M NaCl
Solution de rinçage (5 % d'acétonitrile dissous dans 0,5 M de Nacl)
3 % d'acide trifluoroacétique (TFA)
eau déionisée
20 % d'acétonitrile
Tampon TE : 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8,0
Étape 1
Préparation des échantillons
Ajoutez 0,5 M de NacI à l'échantillon d'oligonucléotides jusqu'à un volume de 2 mL.
Activation de la colonne de dessalement
Activation : 1 mL d'acétonitrile a été utilisé pour activer la colonne.
Équilibrage : Équilibrer la colonne avec 1 mL de solution TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Processus de nettoyage
1. Passez 2 ml de solution contenant des oligonucléotides dans une colonne de dessalement.
2. Rincez la colonne 2 fois avec 1 mL de solution de rinçage pour éliminer les séquences infructueuses.
3. Rincez la colonne 2 fois avec 1 ml d’eau déionisée pour éliminer les sels.
4. Rincez la colonne 2 fois avec 1 ml d'acide trifluoroacétique à 3 % pour éliminer le DMT et observez que la couche adsorbée devient orange-rouge ; et
5. Rincez la colonne de dessalage deux fois avec 1 ml d’eau déionisée pour éliminer l’acide trifluoroacétique et les sels résiduels.
6. Éluez 1 ml d'acétonitrile à 20 % et assemblez.
Étape 2
Préparation des échantillons
Ajoutez 0,5 M de NacI à l'échantillon d'oligonucléotides jusqu'à un volume de 4 mL.
Activation de la colonne de dessalement
Activation : 2 mL d'acétonitrile ont été utilisés pour activer la colonne.
Équilibrage : équilibrer une colonne de 2 mL avec 0,1 M de TEAA (PH 7,0).
Processus de nettoyage
1. Passez 4 ml de solution contenant des oligonucléotides dans une colonne de dessalement.
2. Rincez la colonne 2 fois avec 2 ml de solution de rinçage pour éliminer les séquences infructueuses.
3. Rincez la colonne 2 fois avec 2 ml d'eau déionisée pour éliminer les sels ;)
4. Rincez la colonne 2 fois avec 2 ml d'acide trifluoroacétique à 3 % pour éliminer le DMT, la couche d'adsorption est devenue rouge orangé.
5. Rincez la colonne avec de l'eau déminéralisée deux fois avec 2 ml d'eau déionisée pour éliminer l'acide trifluoroacétique et les sels résiduels.
6. Éluez 2 ml d'acétonitrile à 20 % et assemblez.
Étape 3
Préparation des échantillons
Ajoutez 0,5 M de Nac à l'échantillon d'oligonucléotides jusqu'à un volume de 10 mL.
Activation de la colonne de dessalement
Activation : 5 mL d'acétonitrile ont été utilisés pour activer la colonne.
Équilibrage : La colonne a été équilibrée avec 10 mL de TEAA 0,1 m (PH 7,0).
Processus de nettoyage
1. 10 mL de solution contenant des oligonucléotides ont été passés à travers une colonne de dessalement.
2. La colonne a été lavée deux fois avec 5 ml de solution de rinçage pour éliminer les séquences infructueuses.
3. Rincez la colonne deux fois avec 5 ml d’eau déionisée pour éliminer les sels.
4. Lavez la colonne deux fois avec 5 ml d'acide trifluoroacétique à 3 % pour éliminer le DMT et remarquez que la couche d'adsorption est devenue rouge orangé.
5. Rincez la colonne deux fois avec 5 ml d'eau déionisée pour éliminer l'acide trifluoroacétique et les résidus de sel.
6. Éluer 5 ml d’acétonitrile à 20 % et recueillir.
Étape 4
Préparation des échantillons
Ajoutez 0,5 M de Nacl à l’échantillon d’oligonucléotides jusqu’à un volume de 0,5 mL.
Activation de la plaque à 96 puits
Activation : 0,5 mL d'acétonitrile a été passé dans chaque puits d'une plaque à 96 puits.
Équilibre : Équilibrer une plaque à 96 puits avec 0,5 mL de solution TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Procédure de nettoyage
1. Passer 0,5 mL de solution contenant des oligonucléotides à travers une plaque à 96 puits.
2. Rincez la plaque à 96 puits 2 fois avec 0,5 mL de solution de lavage pour éliminer les mauvaises séquences.
3. Rincez la plaque à 96 puits 2 fois avec 0,5 mL d'eau déionisée pour éliminer les sels.
4. Lavez la plaque à 96 puits 2 fois avec 0,5 ml d'acide trifluoroacétique à 3 % pour éliminer le DMT et observez que la couche d'adsorption devient orange-rouge ; et
5. Rincez la plaque à 96 puits deux fois avec 0,5 ml d'eau déionisée pour éliminer l'acide trifluoroacétique et les résidus de sel.
6. Éluez 0,5 ml d'acétonitrile à 20 % et récupérez le matériau.
Étape 5
Préparation des échantillons
Ajoutez 0,5 M de Nacl à l'échantillon d'oligonucléotides jusqu'à un volume de 1,2/2 mL.
Activation de la plaque à 96 puits
Activation : Passer 1 à 4 ml (0,5 mL) d'acétonitrile dans chaque puits d'une plaque à 96 puits.
Équilibrage : équilibrer une plaque à 96 puits avec 1 à 4 ml de 0,5 ml de solution TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Processus de nettoyage
1. Passer 0,5 à 2 ml de solution contenant des oligonucléotides à travers une plaque à 96 puits.
2. Rincez la plaque 96 puits 2 fois avec 1/2 mL de solution de lavage pour éliminer les séquences malencontreuses ;)
3. Rincez la plaque à 96 puits deux fois avec 1/2 ml d'eau déionisée pour éliminer les sels.
4. Lavez 2 fois la plaque à 96 puits avec 1/2 ml d'acide trifluoroacétique à 3 % pour éliminer le DMT et observez que la couche d'adsorption devient orange-rouge ;
5. Rincez la plaque à 96 puits avec 1/2 mL d'eau déionisée 2 fois pour éliminer l'acide trifluoroacétique et les résidus de sel.
6. Éluer 1/2 ml d'acétonitrile à 20 % et recueillir le matériau.
Étape 6
Réactif
Acétonitrile de qualité chromatographique
0,05 M THÉ, PH 7,0
2 M THÉ, PH 7,0
Eau déionisée (pour le dessalement et la purification des molécules d'ARN sans RNase) 60 % d'acétonitrile (dissous dans de l'eau contenant 0,5 % de NH4OH)
20 % d'acétonitrile (pour dessaler les molécules d'ADN ou d'ARN après déprotection)
Tampon TE : 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8,0
Préparation des échantillons
Oligo purifié par HPLC : ajouter une quantité appropriée de TEAA 0,1 M aux oligos purifiés par HPLC de sorte que la concentration finale en acétonitrile soit ≤ 5 %. Oligos purifiés : dissoudre les fragments de gel contenant les oligonucléotides dans TEAA 0,05 M, retirer les fragments de gel, dissoudre l'oligo dans au moins 2 mL de TEAA 0,1 M.
Oligos dissous dans NH4OH ou AMA : évaporer jusqu'à ce que le mélange soit sec et dissoudre dans 2 mL de TEAA 0,1 M.
Activation de la pompe de dessalement
Activation : 1 mL d'acétonitrile a été utilisé pour activer la colonne.
Équilibrage : équilibrer une colonne TEAA 2 M de 1 mL (pH 7,0).
Procédure de dessalement d'oligos pour la purification HPLC
1. Passez la solution contenant les oligonucléotides à travers la colonne de dessalement.
2. Rincez la colonne de dessalement deux fois avec 1 ml d’eau déionisée pour éliminer les sels.
3. Éluer à travers une colonne de 1 ml d'acétonitrile à 60 % et recueillir.
Procédé de dessalage des oligos purifiés par la méthode PAAG
1. Passez la solution contenant les oligonucléotides à travers la colonne de dessalement.
2. Rincez la colonne de dessalement deux fois avec 1 ml d’eau déionisée pour éliminer les sels.
3. Éluer à travers une colonne de 1 ml d'acétonitrile à 60 % et recueillir.
Procédure de dessalage des oligogones d'ADN après synthèse
1. Passer la solution contenant les oligonucléotides à travers la colonne de dessalement ; et
2. Rincez la colonne TEAA 0,1 M de 1 mL deux fois pour éliminer les séquences infructueuses.
3. Rincez la colonne de dessalement deux fois avec 1 ml d’eau déionisée pour éliminer les sels.
4. Passez la colonne à travers 1 ml d'acétonitrile à 20 % et assemblez-la.
Procédure de dessalage des oligos d'ARN après synthèse
1. Passez la solution contenant les oligonucléotides à travers la colonne de dessalement.
2. Rincez la colonne avec 2 ml de TEAA 0,1 M.
3. Rincez la colonne avec 2 ml d’eau sans RNase.
4. Passez 2 ml d'acétonitrile à 20 % (eau sans RNase) à travers une colonne, éluez et collectez. Stockage des oligonucléotides
Les oligonucléotides dissous dans 20 % d'acétonitrile et conservés à 4 °C empêchent la croissance des micro-organismes et conviennent au stockage à court terme.
Les oligonucléotides dans une solution d'acétonitrile à 20 % (ou dissous dans un tampon alcalin tel que le TE) peuvent être stockés pendant une longue période à des températures aussi basses que -20 °C.
Les oligonucléotides sous forme de poudre lyophilisée peuvent être conservés longtemps.
Avertissement
Les quantités de réactifs utilisées ne sont que des recommandations et doivent être optimisées dans chaque cas spécifique.
Les quantités de réactifs utilisées ne sont que des recommandations et doivent être optimisées au cas par cas.
La colonne de dessalement doit atteindre un équilibre d'activation suffisant pour éluer les résidus présents sur la colonne/plaque et améliorer la capacité de liaison de la colonne/plaque de dessalement. L'échantillonnage des oligonucléotides synthétisés doit être effectué lentement afin d'éviter que de la poudre de CPG ne pénètre dans la colonne/plaque lors du nettoyage et de la contamination croisée.
Les colonnes/plaquettes de dessalement C18 utilisent une matrice de silice, la plage de pH applicable est de 2 à 7, un pH > 7,5 dissout facilement la matrice de silice, un pH
Lorsque vous utilisez du TFA pour dessaler du DMT, faites attention au temps, car un temps trop long aura pour effet d'éliminer la purine.
Être attaché
Colonnes de synthèse B&M Universal CPG Frits Technologie de dessalage et de purification rapide
Colonnes de synthèse B&M Universal CPG Frits Technologie de dessalement et de purification rapide :
Les frittes CPG universelles B&M sont fabriquées à partir de polyéthylène ultra-pur à poids moléculaire ultra-élevé importé et de poudre CPG importée, traitées par une technologie spéciale, ont un bon effet de synthèse dans la colonne de synthèse, un faible taux de mutation et une qualité de produit fiable.
Une fois la synthèse terminée dans le synthétiseur de la série Dr.Oligo/Mermade et l'ammoniac dissous, Oligo peut être élué directement dans la colonne de synthèse, et après dosage et drainage, il peut être utilisé pour la réaction PCR de routine directement sans étapes de purification supplémentaires, ce qui est pratique à utiliser, permet de réduire les coûts et d'accélérer la livraison !
Les étapes spécifiques de l'opération sont les suivantes :
1, Synthèse Colonnes/plaques synthétiques B&M Universal CPG Frits 400 µl, mélange eau ultrapure 75 % acétonitrile lavé deux fois pour éliminer les réactifs résiduels synthétiques ;
2, colonnes/plaques d'ammolyse synthétique à l'ammoniac B&M Universal CPG Frits, 90 °C, 80 PSI, ammolyse à l'ammoniac 2 à 2,5 h ;
3, 100 % acétonitrile 400 L laver la colonne/plaque synthétique, deux fois ;
Mélange d'eau ultrapure à 4,90 % d'acétonitrile 400 ul pour colonne/plaque synthétique de lavage, deux fois, pompage à sec ;
5、Volume approprié d'éluant pour éluer les amorces sur la colonne/plaque synthétique, l'éluant peut être de l'eau ultrapure, peut être un mélange d'eau ultrapure de triéthylamine à 3 %, peut également être un mélange d'eau ultrapure d'acétonitrile à environ 20 %.
6. La solution d'élution peut être mesurée, distribuée, drainée, emballée et expédiée.